琼脂糖Agarose
2024/3/24 来源:本站原创 浏览次数:次乌鲁木齐最好的白癜风医院 http://www.jk100f.com/m/
常用的琼脂糖非常适合用于50bp至50kbp的DNA片段的分析和制备DNA电泳。
琼脂糖应用:
※PCR产物的分离
※DNA:约0.05kbp–50kbp
※RNA:约0.30kb–20kb
凝胶中的琼脂糖参数:
※凝胶温度:≤37°C
※熔化温度:≤90°C
※电内渗:≤0.
※凝胶强度(1.5%):≥g/cm2
※硫酸盐含量:≤0.10%
※含水量:≤10.0%
验琼脂糖质量:
凝胶电泳的“分子生物学级”
※无DNase和RNase认证
※无DNA结合
※批次间一致性高
琼脂糖使用方法:
方法1:微波炉加热使用琼脂糖
1.将泡芙(约为最终体积的90%)倒入可容纳四倍凝胶体积的烧瓶中,并用磁力搅拌棒。
2.将烧瓶放在磁力搅拌器上,在不断搅拌的同时缓慢加入琼脂糖粉,以避免凝结。
3.取下烧瓶磁力搅拌棒。
4.将剩余缓冲液添加至所需的最终体积。
5.加热前,称量并记录烧瓶中琼脂糖和所有成分的重量。在微波炉(瓦)中加热1-2分钟。轻轻旋转烧瓶以混合溶液。警告:由于河豚的微波加热,液体沸腾可能会延迟!
6.使用微波炉,短时间加热5-10秒或直到含琼脂糖的溶液沸腾,加热阶段之间的间隔为10-15秒,轻轻旋转烧瓶以分散气泡。当心滚烫的玻璃器皿和液体。继续,直到琼脂糖完全溶解。
7.再次称量烧瓶,并用温热的去离子水加满损失的体积。轻轻旋转烧瓶,确保琼脂糖和所有成分完全混合。
8.让溶液在室温下冷却15–20分钟,或直到凝胶温度达到50–60°C。
方法2:水浴法
1.参见方法1(微波炉中的琼脂糖):步骤1–2和4
2.加热前称量并记录烧瓶的重量。将琼脂糖悬浮液在沸腾的水浴中加热,不断搅拌。
3.将琼脂糖烧瓶和所有成分在水中再浸泡15-20分钟,或直到琼脂糖完全溶解。
4.关闭磁力搅拌器,将装有琼脂糖的烧瓶留在浴中15分钟。
5.再次称量烧瓶,并用温热的去离子水加满损失的体积。轻轻旋转烧瓶,确保琼脂糖和所有成分完全混合。
6.让琼脂糖溶液在室温下冷却15–20分钟或直到凝胶温度达到50–60°C。
储存:可在室温下储存4年以上
琼脂糖凝胶电泳实验案例:
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