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琼脂糖Agarose

2024/3/24 来源:本站原创 浏览次数:

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常用的琼脂糖非常适合用于50bp至50kbp的DNA片段的分析和制备DNA电泳。

琼脂糖应用:

※PCR产物的分离

※DNA:约0.05kbp–50kbp

※RNA:约0.30kb–20kb

凝胶中的琼脂糖参数:

※凝胶温度:≤37°C

※熔化温度:≤90°C

※电内渗:≤0.

※凝胶强度(1.5%):≥g/cm2

※硫酸盐含量:≤0.10%

※含水量:≤10.0%

验琼脂糖质量:

凝胶电泳的“分子生物学级”

※无DNase和RNase认证

※无DNA结合

※批次间一致性高

琼脂糖使用方法:

方法1:微波炉加热使用琼脂糖

1.将泡芙(约为最终体积的90%)倒入可容纳四倍凝胶体积的烧瓶中,并用磁力搅拌棒。

2.将烧瓶放在磁力搅拌器上,在不断搅拌的同时缓慢加入琼脂糖粉,以避免凝结。

3.取下烧瓶磁力搅拌棒。

4.将剩余缓冲液添加至所需的最终体积。

5.加热前,称量并记录烧瓶中琼脂糖和所有成分的重量。在微波炉(瓦)中加热1-2分钟。轻轻旋转烧瓶以混合溶液。警告:由于河豚的微波加热,液体沸腾可能会延迟!

6.使用微波炉,短时间加热5-10秒或直到含琼脂糖的溶液沸腾,加热阶段之间的间隔为10-15秒,轻轻旋转烧瓶以分散气泡。当心滚烫的玻璃器皿和液体。继续,直到琼脂糖完全溶解。

7.再次称量烧瓶,并用温热的去离子水加满损失的体积。轻轻旋转烧瓶,确保琼脂糖和所有成分完全混合。

8.让溶液在室温下冷却15–20分钟,或直到凝胶温度达到50–60°C。

方法2:水浴法

1.参见方法1(微波炉中的琼脂糖):步骤1–2和4

2.加热前称量并记录烧瓶的重量。将琼脂糖悬浮液在沸腾的水浴中加热,不断搅拌。

3.将琼脂糖烧瓶和所有成分在水中再浸泡15-20分钟,或直到琼脂糖完全溶解。

4.关闭磁力搅拌器,将装有琼脂糖的烧瓶留在浴中15分钟。

5.再次称量烧瓶,并用温热的去离子水加满损失的体积。轻轻旋转烧瓶,确保琼脂糖和所有成分完全混合。

6.让琼脂糖溶液在室温下冷却15–20分钟或直到凝胶温度达到50–60°C。

储存:可在室温下储存4年以上

琼脂糖凝胶电泳实验案例:

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